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外泌體的主流共識---電鏡、NTA和WB實驗

發(fā)布時間: 2023-08-11  點擊次數(shù): 650次

外泌體的形狀是杯狀或茶托形,可以通過電鏡觀察形態(tài)進(jìn)行初步確定,外泌體的粒徑大小在30-120nm左右,通過NTA可以檢測到粒徑大小,外泌體本身具有一些特殊的標(biāo)志蛋白,通過WB可以檢測出來。


目前鑒定外泌體主要包括三方面實驗,但是三方面實驗在鑒定外泌體的存在、數(shù)量和完整性上分別存在一些缺陷。



電鏡




可以直觀的看到粒子的形態(tài),因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性但是包括支原體、鐵蛋白聚團、聚乙二醇蛋白聚團、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似,并且電鏡只能展示局部景象。因此,電鏡成像無法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子,且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量。




NTA




是一種測算粒子群體直徑分布和粒子數(shù)量的計算方法,它通過光學(xué)原理感知粒子的存在,因此可以確認(rèn)外泌體樣品中的“外泌體"數(shù)量和直徑的群體特征,但是無法確認(rèn)檢測到的粒子是否為外泌體,不能反映粒子形態(tài),無法將外泌體和其他納米粒子區(qū)分開。因此NTA不能確認(rèn)外泌體的真實存在和外泌體的完整性。




WB




可以鑒定外泌體中存在的特定蛋白,WB檢測外泌體標(biāo)志蛋白可以說明外泌體成分的存在。但是目前的這些標(biāo)志物蛋白只是會在外泌體里富集,而并不是外泌體所有的,諸如CD63、ALIX等在細(xì)胞中都有,在一些細(xì)胞碎片、溶酶體、胞內(nèi)體中也大量存在。因此,WB僅能證實外泌體成分的存在,無法確認(rèn)外泌體的數(shù)量和完整性。


因此,通過三個實驗的相互佐證來確認(rèn)外泌體的存在、數(shù)量和完整性。當(dāng)且僅當(dāng)三個實驗結(jié)果都正常(即電鏡看到經(jīng)典結(jié)構(gòu),WB檢測到外泌體標(biāo)志物的富集,NTA測算直徑分布符合外泌體定義),才能確認(rèn)研究者成功的分離純化了外泌體,基于這一成功的分離方法所得到的后續(xù)研究結(jié)果才能認(rèn)為是外泌體相關(guān)的研究結(jié)果。其實,好的鑒定方法應(yīng)當(dāng)是免疫電鏡結(jié)合NTA,但是免疫電鏡的難度過高,因此最終形成了電鏡、NTA和WB三個實驗鑒定外泌體的主流共識。


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